ALSTEM VP100說明書
ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識的科學(xué)家創(chuàng)立。
描述
慢病毒包裝混合物是一種即用型第三代基于HIV的慢病毒包裝系統(tǒng)，其中質(zhì)粒表達(dá)慢病毒生產(chǎn)所需的元件。為了生產(chǎn)高質(zhì)量的慢病毒顆粒，所需要的只是含有您感興趣基因的慢病毒表達(dá)載體。慢病毒包裝混合物含有必需的包裝載體，其含有病毒結(jié)構(gòu)蛋白和包膜載體以表達(dá)水泡性口炎病毒糖蛋白（VSVG）。慢病毒包裝混合物是TAT獨立的，因為它僅支持具有嵌合5'LTR的慢病毒表達(dá)載體，其中HIV啟動子被CMV或RSV替代。
產(chǎn)品規(guī)格 | |
產(chǎn)品名稱 | 慢病毒包裝混合物 |
目錄 ＃ | VP100 |
尺寸 | 200μl |
運輸 | 環(huán)境溫度 |
儲存和穩(wěn)定性 | 儲存在-20°C。根據(jù)指示儲存，本產(chǎn)品可穩(wěn)定保存6個月。應(yīng)通過分成一次性等分試樣來小化凍融循環(huán)。將等分試樣儲存在-20°C冰箱中直至準(zhǔn)備使用。 |
質(zhì)量控制 | 每批慢病毒包裝混合物在使用人胚胎腎293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染測定中進(jìn)行功能測試。 |
用法 | 對于100毫米慢病毒包裝，將2.5微克慢病毒表達(dá)載體與20微克慢病毒包裝混合物混合。 對于150毫米慢病毒包裝，將5微克慢病毒表達(dá)載體與40微克慢病毒包裝混合物混合。 |
限制使用 | 僅供研究使用。不得用于診斷或治療程序。 |
慢病毒包裝混合物是第三代包裝質(zhì)粒的優(yōu)化配方，提供輔助功能以及產(chǎn)生高滴度慢病毒所需的反式結(jié)構(gòu)和復(fù)制蛋白。
1.將含有慢病毒顆粒的培養(yǎng)基從平板轉(zhuǎn)移到無菌容器中，并以300×g離心培養(yǎng)基10分鐘以除去細(xì)胞碎片。
2.通過0.45μm過濾器過濾上清液。
3.將過濾的上清液轉(zhuǎn)移到無菌容器中，并向每4體積的含有慢病毒的上清液中加入1體積的冷的慢病毒沉淀溶液（4℃）。（實施例：5ml慢病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。
4.充分混合并冷藏3小時至過夜。與Lentivirus沉淀溶液混合的含有慢病毒的上清液在4°C下可穩(wěn)定長達(dá)4天。
5.在4℃下以1500×g離心混合物30分鐘。離心后，慢病毒顆?？稍谌萜鞯撞匡@示為米色或白色顆粒。
6.丟棄上清液。通過以1500×g離心5分鐘來旋轉(zhuǎn)殘留溶液。通過抽吸去除所有的液體痕跡，小心不要打擾顆粒中沉淀的慢病毒顆粒。
7.使用冷的無菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始體積重懸慢病毒顆粒。
8.在低溫小瓶中分裝并儲存在-80°C直至準(zhǔn)備使用。
| 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
| VB100 | ViralBoost | 1毫升 | alstembio |
| VC100 | 慢病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| V020 | TransPlus™病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑 | 100μl/500μl | alstembio |
| CILV02 | hTERT細(xì)胞永生化試劑盒 | 5 x20μl | alstembio |
| VC200 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| VP100 | 慢病毒包裝混合物 | 200μl | alstembio |
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