上海起發(fā)為InvivoGen國內(nèi)代理商，美國InvivoGen Invivogen 主要提供抗生素，轉(zhuǎn)染試劑，細胞因子，細胞系，質(zhì)粒等產(chǎn)品?？股睾w了細胞培養(yǎng)、篩選全系列，如Blasticidin S,Hygromycin B , Phleomycin, Primocin,   Zeocin等細胞分選常用抗生素。尤其以抗細胞支原體污染的抗生素Plasmocin™zui為出名，該抗生素因其性能受到客戶*。

品牌：Invivogen

貨號：pcpgf-bas

品名：pCpGfree-basic with mSEAP reporter gene  帶有mSEAP報道基因的pCpGfree-basic

規(guī)格：20 µg

pCpGfree-basic是*不含CpG二核苷酸的報道質(zhì)粒。這些質(zhì)粒缺乏完整的啟動子區(qū)域（與pCpGfree質(zhì)粒相比）。

pCpGfree-堿性質(zhì)粒在mSEAP或Lucia（一種分泌型熒光素酶報告基因）上游含有多克隆位點（MCS）。報道基因在用該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細胞中的表達取決于在報道基因上游插入功能性啟動子或增強子/啟動子盒。

因此，pCpGfree堿性質(zhì)粒允許單獨研究CpG甲基化對啟動子的影響，或與增強子元件組合。

產(chǎn)品規(guī)格

•不含CpG的質(zhì)粒骨架

•不含增強子/啟動子區(qū)域的報告質(zhì)粒：

   - 鼠分泌的堿性磷酸酶（SEAP）

   - 分泌型熒光素酶（Lucia）

•可在含Zeocin™的大腸桿菌中選擇

本產(chǎn)品受限制使用許可（請參閱條款和條件）。

內(nèi)容

•提供20μg作為凍干DNA的pCpGfree-堿性質(zhì)粒

•將大腸桿菌 GT115菌株凍干在紙盤上

•4袋大腸桿菌 Fast- Media®Zeo（2 TB和2瓊脂）

描述

質(zhì)粒特征

在大腸桿菌中復(fù)制和選擇質(zhì)粒所需的所有元件和哺乳動物細胞中的基因表達*沒有CpG二核苷酸。此外，所有Dam甲基化位點（GATC）已被去除以防止原核甲基化。

用于在大腸桿菌中表達的元件

•復(fù)制起點：大腸桿菌 R6K gamma ori已被修飾以去除所有CpG。該起源由pir基因編碼的R6K特異性啟動子蛋白π激活[1]。

•細菌啟動子：EM2K是細菌EM7啟動子的無CpG版本。

•選擇標(biāo)記：Zeocin™抗性基因是一個含有大量CpG二核苷酸的小基因（<400 bp）。一個合成的新等位基因被創(chuàng)建，不含CpGs。

用于在哺乳動物細胞中表達的元件

•合成的mSEAPΔCpG基因：通過化學(xué)合成構(gòu)建的鼠SEAP基因的無CpG等位基因。

•聚腺苷酸化信號：聚腺苷酸化信號是晚期SV40聚腺苷酸化信號的無CpG形式。

MAR：基質(zhì)連接區(qū)域（MAR）是典型的富含AT的序列，能夠在獨立調(diào)控的結(jié)構(gòu)域之間形成屏障[2]。pCpGfree質(zhì)粒含有來自人IFN-β基因或β珠蛋白基因的5'區(qū)域的兩個MAR，因為它們天然不含CpG，所以被選擇。MARs被放置在細菌和哺乳動物轉(zhuǎn)錄單位之間。

•MCS：多克隆位點包含幾個常用的限制性位點，以方便克隆感興趣的基因。5'Sda I，Bsp 120I，Avr II，Nsi I，Ppu 10I，Sca I，Bam HI，Spe I 3'

由于存在R6Kγ復(fù)制起點，pCpGfree-basic只能在表達pir突變基因的大腸桿菌突變株中擴增。它不會在標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌菌株中復(fù)制。因此，pCpGfree-basic與大腸桿菌 GT115菌株一起提供，該菌株也是Dcm甲基化缺陷的pir突變體。

1. Wu F.等人 1995.對R6Kγ-起源核心復(fù)制子賦予穩(wěn)定維持的DNA片段。J Bacteriol。177（22）：6338-45。

2. Bode J.等，1996。支架/基質(zhì)附著區(qū)：具有多種調(diào)節(jié)功能的拓撲開關(guān)。Crit Rev Eukaryot Gene Expr。圖6（2-3）：115-38。

細節(jié)

基于pCpGfree的骨干

MCS： 5'-SdaI，Bsp120I，AvrII，NsiI，Ppu10I，ScaI，BamHI，SpeI，HindIII-3'

程序

1-將啟動子和/或增強子片段插入pCpGfree-basic

2-用CpG甲基化酶（Sss I）或位點特異性甲基化酶（Hha I，Hpa II）處理重組質(zhì)粒。

3-用甲基化酶處理或未處理的質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染細胞。

4-通過使用適當(dāng)?shù)臋z測試劑確定報告子表達來分析啟動子CpG甲基化。

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